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Jennifer Doudna最新研究:基于CRISPR的新型RNA敲低物件问世,效率更高、脱靶更低

2025-08-03 12:19

分析技术人员来进行了 RNA 测序,以检查 Csm 介导的响高于在内共生细胞之中的潜在脱靶现像。即便如此于MLT-暴力事件检验,Csm 处理暴力事件的检验在最大限度转录本上借助于了相当大响高于,同时几乎未产生其他差异表达的基因组。即便如此之下,Cas13 处理暴力事件的检验在借助于相当大响高于的同时不会产生数以千计的差异表达的脱靶基因组。另外,RNAi(shRNA)处理暴力事件的检验虽然差异表达的脱靶基因组较少,但是其对内共生细胞核 RNA(例如MALAT1)的响高于效果却欠佳。这说明了 Csm 是三种 RNA 响高于方式之中的最优自由选择。

Csm、Cas13或shRNA处理暴力事件的内共生细胞,与MLT-暴力事件内共生细胞间转录技术水平的差异比较

为了证明三种响高于方式产生的内共生细胞毒素,分析技术人员分别用 Csm、Cas13 或 shRNA 构建转染内共生细胞后,使用 WST-1 检测内共生细胞在一段时间内的裂解控制能力。结果说明了,Cas13 处理暴力事件的内共生细胞,其裂解控制能力相当大下降,而 Csm 或 shRNA 处理暴力事件的内共生细胞,其裂解控制能力则不受直接影响。

Csm、Cas13或shRNA转染后,内共生细胞的相对于活力/裂解控制能力比较

区域性本分析的各项检验结果,不难发现 Csm 介导的 RNA 响高于彰显 Cas13 和 shRNA 策略的优点:同时拥有 Cas13 稳健的响高于和内共生细胞核抗原控制能力,以及 shRNA 的最小的脱靶和内共生细胞毒素。依靠 CRISPR-Csm,分析技术人员在人类内共生细胞之中借助于了高效的 RNA 响高于 (90%-99%),证实了多蛋白 CRISPR-Cas 现像叔父复合物作为内共生生物RNA抗原基本功能的可行性和正确性。

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